اشترك بالحزمة الذهبية واحصل على وصول غير محدود شمرا أكاديميا
تسجيل مستخدم جديدستخدام تقنية PCR للكشف عن الليشمانيا المدارية في سورية
Using of the PCR method for Identification of Leishmania tropica in Syria
1573
0 96
0
(
0
)
تمت اﻹضافة من قبل
Shamra Editor
اسأل ChatGPT حول البحث
ينتشر داء الليشمانيا في ثمانٍ و ثمانين دولة من دول العالم و منها الجمهوريـة العربيـة الـسورية، و يسبب هذا الداء طفيلي وحيد خلية من أنواع جنس الليشمانيا، و ينتمي لهذا الجنس نحو اثنين و عشرين نوعاً ممرضاً للإنسان. يعرف للداء ثلاثة أشكال سريرية هي الداء الجلدي و الداء الجلدي المخاطي و الداء الحشوي. و قد طُورت مجموعة من طرائق التشخيص و تحديد نوع الطفيلي بهدف إعطاء العلاج المناسب، يتضمن التحليل الايزوانزيمي و الطرائق المصلية المناعية و تقانات تهجين DNA و لعل من أهم الطرائـق الجزيئية المعتمدة حالياً في تشخيص هذا الداء و معرفة نوع الطفيلي المسبب و أدقها هي تقنيـة التفاعـل السلسلي للبوليميراز PCR التي تعتمد إما على DNA الجينومي أو DNA الكينيتوبلاستي. قمنا في هذا العمل باستفراد نمطي DNA في خطوة واحدة من عزلات مأخوذة من أفراد مـصابين بـداء الليـشمانيا الجلدية و مستنبتة في المختبر. و اِستُخدم DNA الكينيتوبلاستي لتحديد نوع الطفيلـي باسـتخدام تقنيـة PCR؛ و ذلك بوجود مرئسات نوعية تضخم شدفاً ذات أطوال مختلفة مميزة لنوع الطفيلي. و قد حدد فـي هذه الدراسة نوع الطفيلي المسبب لداء الليشمانيا الجلدية عند هـؤلاء المـصابين، و تبـين أن العـزلات المدروسة جميعها هي من نوع الليشمانيا المدارية tropica. L.
Leishmaniasis spreads in eighty-eight countries, including the Syrian Arab Republic. This disease is caused by a protozoic parasite of the genus Leishmania. Twenty-two species of leishmania were reported to be pathogenic for human. The disease is presented in three clinical forms: cutaneous, mucocutaneous and visceral leishmaniasis. A set of methods for diagnosis and identifying the type of parasite have been developed in order to give appropriate treatment. These methods include isoenzyme analysis, serological and immunological methods and DNA hybridization. The polymerase chain reaction (PCR), using genomic or kinetoplastid DNA; provides an excellent tool for diagnosis and characterization of leishmania species. In this work, the two types of DNA were extracted in one step from cultured isolates taken from patients. We have used kinetoplastid DNA and specific primers to determine parasite species by PCR. These primers amplify species specific fragment. In this study, we have determined that the causative species of the cutaneous leishmaniasis in all patients was L.tropica.
المراجع المستخدمة
Alborzi, A., Pouladfar, G. R., Fakhar, M., Motazedian, M. H., Hatam, G. R. and Kadivar, M. R. (2008). Isolation of Leishmania tropica from a patient with visceral leishmaniasis and disseminated cutaneous leishmaniasis, southern Iran. Am J Trop Med Hyg 79, 435-7
Alexander, J., Satoskar, A. R. and Russell, D. G. (1999). Leishmania species: models of intracellular parasitism. J Cell Sci 112 Pt 18, 2993-3002
Aljeboori, T. I. and Evans, D. A. (1980a). Leishmania spp. in Iraq. Electrophoretic isoenzyme patterns. I. Visceral leishmaniasis. Trans R Soc Trop Med Hyg 74, 169-77
قيم البحث
اقرأ أيضاً
ترمي هذه الدراسة إلى الوقوف على المحتوى البروتيني للطورين الرئيسين لليشمانيا: أمامي السوط
promastigote و عديم السوط amastigote و لتعيين الأوزان الجزيئية للبروتينات الأكثر تعبيراً و ذلـك
بوساطة تقنية الرحلان الكهربائي العمودي و من ثم تحديد أهم مستضد
ات هذين الطورين بتقنية التبـصيم
المناعي و باستخدام أمصال فئران منعت بالخلاصات البروتينية لهذه الأطوار و مقارنتها ببعـضها بهـدف
تحديد المستضدات المشتركة بينهما و المستضدات الخاصة بكل طور، و ذلك بغية اسـتخدامها فـي إطـار
استراتيجية تلقيحية تجاه الليشمانيا.
يعد البروتين الغشائي لمنشأ الحركة-11 (KMP-11)، الموجود في جميع وحيدات الخلية ذات الأسواط المدروسة إلى الآن، مرشحاً محتملاً ليكون لقاحاً ضد داء الليشمانيات. إذ أن الجزيئة المرشحة لتكون لقاحاً مناسباً ضد داء الليشمانيات يجب أن يعبر عنها في عديمات السوط
، الأشكال المخمجة للثدييات. إلا أن التعبير عن KMP-11 في عديمات السوط ما يزال موضع جدل. في هذه الدراسة، قمنا أولاً بعزل و زراعة و تنميط عينة من الليشمانيا المدارية L. tropica، و من ثم قمنا بدراسة التعبير عن KMP-11 في أماميات السوط و في عديمات السوط لطفيلي هذه السلالة بوساطة تقانة RT-PCR مستخدمين شفعاً من البادئات النوعية. أظهرت النتائج أن RNA الرسول للمورثة KMP-11 موجود في أماميات و عديمات السوط من الليشمانيا المدارية. يتوافق التعبير عن هذه الجزيئة في عديمات السوط مع قدرة الحماية المناعية التي أظهرها سابقاً لقاح DNA تجريبي يقوم على المورثة KMP-11، كما و يتوافق مع حدوث استجابة مناعية خلطية و خلوية الوساطة اتجاه البروتين KMP-11 في الحيوانات المصابة بالليشمانيا.
يهدف هذا العمل إلى التحري عن دور السبيل الخلوي الخاص بالبروتين كيناز PKC) C) في الموت الخلوي المبرمج للأشكال أمامية السوط لطفيلي الليشمانيا المدارية، من خلال دراسة تأثير مادة مثبطة لهذا السبيل و هي
STS) Staurosporine). أظهرت النتائج أن معالجة الأشك
ال أمامية السوط المستنبتة من المثبط كافية لكبح السبيل الإشاري ل PKC بشكل كلي، بينما أظهر اختبار السمية أن تركيز المثبط القاتل للنصف كان (IC50 = 2.146μM).
استُخدمت تقانة تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR للكشف عن فيروس التهاب القصبات المعدي IBV) infectious bronchitis virus) في قطعان الفروج التجارية في سورية، حيث جمعت 50 عينة مرضية مشتبهة من أنسجة
الرغامى في القصبة الهوائية، والكلى، من 50 قطيع من دجاج اللحم (الفروج) المشتبه بإصابتها بمرض التهاب القصبات المعدي infectious bronchitis (IB)، والموزّعة في مناطق مختلفة من سورية (اللاذقية، وطرطوس، وحماه، وريف دمشق). حيث تم استخلاص الحمض النووي الفيروسي RNA من أنسجة العينات المرضية مباشرة، ومن ثم تحويل RNA إلى cDNA بتقنية النسخ العكسي RT-PCR، واخضاعها لاختبار تفاعل PCR، وتفاعل Nested PCR. اختيرت البادئات المستخدمة في تفاعل RT-PCR من تحت وحدة S1 للمورثة S) spike) التي تتركز فيها الطفرات التي تصيب مورثة الفيروس في هذه المنطقة (منطقة شديدة التباين)، كما تم تمرير 10 من العينات الإيجابية المحتوية على الفيروس بأجنة الدجاج النامية الخالية من العوامل الممرضة، Specific pathogen free embryonated egg ((SPF بعمر 9-11 يوم تحضين وحسب الطرق المعتمدة في علم الفيروسات. نُفذ البحث في مخابر الهيئة العامة للبحوث العلمية الزراعية (مركز بحوث اللاذقية) بالتعاون مع مخبر PCR في كلية الطب البيطري بحماه. بيّنت نتائج اختبار RT-PCR، وجود 37 حالة إيجابية للاختبار وبنسبة 74% من عينات المزارع المختبرة، وأظهرت نتائج الحقن في أجنة الدجاج النامية آفات تشريحية واضحة ومميزة لفيروس التهاب القصبات المعدي بعد 5- 6 أيام من الحقن، وتأخر وعدم تطور ونمو الجنين (تقزم)، وتشابك أصابع ونزف دموي، بالمقارنة مع الشاهد السلبي، وأظهرت النتائج أيضاً حساسية تقنية RT-PCR للكشف عن فيروس IBV.
يشكل داء الليشمانيات مشكلة صحية هامة في سوريا, نظرا للانتشار الواسع لطفيليات
الليشمانية المدارية, و صعوبة السيطرة على مخازن الطفيلي, و كذلك عدم وجود أدوية فعالة
و آمنة في آن معاً. و نظرا لقلة الدراسات التي تتناول جينوم الليشمانية المدارية, قمنا في
هذه الدراسة بتحري وجود جينSW3 gene SW في جينوم طفيلي الليشمانية المدارية.
سجل دخول لتتمكن من نشر تعليقات
التعليقات
جاري جلب التعليقات
سجل دخول لتتمكن من متابعة معايير البحث التي قمت باختيارها
